Protocolo para extração de DNA de raízes de cana-de-açúcar micorrizadas visando o monitoramento ambiental

Resumo

O monitoramento da saúde dos solos onde se cultiva cana-de-açúcar é de suma importância para a sustentabilidade deste agrossistema. Uma alternativa para este processo é o acompanhamento da população de fungos micorrízicos arbusculares associados à cultura. Mas, para isto, necessita-se de eficientes protocolos para extração total do DNA das raízes micorrizadas. Assim, objetivou-se avaliar dois protocolos para extração do DNA total de raízes de cana-de-açúcar micorrizadas. A pesquisa foi realizada no município de Castelo Branco-PR, em uma área cultivada com cana-de-açúcar, a área foi subdividida em duas megaparcelas de 2,0 ha cada e foram coletadas amostras de raízes das plantas de cana-de-açúcar em 15 pontos distintos por megaparcela. Dois protocolos foram testados, o I baseado na trituração das raízes com pérolas de vidro e emprego de clorofane e o II com maceração das raízes com nitrogênio líquido e emprego do detergente SDS a 25%. Em ambos se utilizou 50 mg de raízes para extração do DNA e para verificação da qualidade do DNA extraído foi realizada corrida eletroforética em gel de agarose a 1% e revelação em transiluminador LED. O protocolo I proporcionou a obtenção de DNA em boa concentração e pureza e o protocolo II mostrou-se pouco eficiente para extração de DNA de raízes de cana, pois verificou-se muitos contaminantes em todas as amostras extraídas, contaminantes estes que podem interferir no emprego do DNA extraído para outras aplicações.